Tetraadide eraldamine
Ühes askuses paikneva 4 askospoori eraldamiseks kasutatakse spetsiaalset mikroskoopi. Tetraadide mikroskoop on varustatud mikromanipulaatoriga ja liigutatava aluslauaga. Spoorid eraldatakse klaasfiibrist mikronõela abil. TÜ Molekulaar- ja Rakubioloogia Instituudis on olemas pool-automaatne Singer Instrument Co. Ltd. MSM System Series 400 tetraadide mikroskoop (Joonis 9).
(vaata lisaks: http://www.singerinstruments.com/)
Pagaripärmi tetraadide eraldamise käigus (vt. Video 1):
- askusi töödeldakse Zymolyase-20T (Arthrobacter luteus
-1,3-glucan laminaripentaohydrolase) lahusega. Zymolyase lagundab askuse kesta ning spoorid pääsevad välja. Siiski jäävad nad omavahel seotuks ning on mikroskoobis endiselt tuvastatavad (vt. Joonis 3).
- Ühest askusest pärit spooride tetraad transporditakse mikromanipulaatori nõela abil tassi vabale alale.
- Spoorid eraldatakse üksteisest mehaaniliselt - raputatakse mikromanipulaatori nõelaga.
- Ühest tetraadist pärit 4 spoori asetatakse korrapäraselt tassi pinnale.
- Igast elusast spoorist kasvab 2-3 päeva jooksul pärmikoloonia, mida analüüsitakse edasi.
Film näitab ühes askuses paikneva nelja spoori (e. tetraadi) külvamist tassile.
(Allikas: http://www.youtube.com/watch?v=Ify8VtSnT5s)