Poolduva pärmi deletsioonimutantide kollektsioon
Poolduva pärmi deletsioonimutantide kollektsioon sisaldab 4836 diploidset (h+/h+) heterosügootset deletsioonitüve (so. 98,4% kõikidest geenidest).
Iga geeni deleteerimiseks kasutati deletsioonikassetti, mis koosnes selektsioonimarkerist kanMX4, geeni spetsiifilistest koodi järjestustest (UPTAG, DNTAG) ja 80-350 nukleotiidi pikkustest lookuse spetsiifilistest homoloogilistest järjestustest (Joonis 14). Saadud kasseti transformeerimisel pärmirakkudesse toimus homoloogiline rekombinatsioon ning metsiktüüpi lookus asendus deletsioonikassetiga.
Joonis 14. Poolduva pärmi deletsioonimutantide valmistamise põhimõte.
Deletsioonimutantide kollektsiooni kasutati poolduva pärmi eluks hädavajalike geenide kindlaks tegemisel. Heterosügootsed deletsioonimutandid sporuleeriti, spoorid eraldati kasutades tetraadide analüüsi ning spooride idanemist analüüsiti mikroskoopiliselt. Leiti, et 26,1% poolduva pärmi geenidest on hädavajalikud kasvuks rikkal söötmel 25 oC ja 32 oC juures. Seega on poolduva pärmi genoomis 227 hädavajalikku geeni rohkem kui pagaripärmi genoomis. Enamus hädavajalikest geenidest on olulised makromolekulide (DNA, RNA, valgud, lipiidid) metabolismis ja rakulistes protsessides (transkriptsiooni initsiatsioon, translatsioon, ribosoomi kokkupanek, mitokondri funktsioonid).