Transformatsioon Li-soolade juuersolekul
Ito kaastöötajatega avaldasid 1983. a. pärmirakkude transformeerimise meetodi, mis põhines monovalentsete katioonide kasutamisel (Na+, K+, Rb+, Cs+, Li+). Rakud töödeldi 100 mM katiooni lahusega. Seejärel lisati DNA ja polüetüleenglükool (PEG) molekulmassiga 4000. Kasutati ka kuumatöötlust ("heat shock") 42 oC juures. Meetodi väljatöötajad optimiseersid katioonide kontsentratsiooni, töötluse ajad, rakkude ja DNA kontsentratsioonid. Parimad tulemused saavutati liitium atsetaati (LiAc) kasutades.
Näidati, et
- PEG kasutamine on hädavajalik
- LiAc tõstab transformatsiooni efektiivsust
- kuumatöötlus tõstab transformatsiooni efektiivsust
- kõige paremad tulemused saadakse logaritmilises kasvufaasis olevate rakkudega
Hilisemad meetodi
modifikatsioonid (so. 2-merkaptoetanooliga eeltöötlus, kompetentsete
rakkude külmutamine, kolooniate transformatsioon, kandur ("carrier") DNA kasutamine, DMSO lisamine jne.) võimaldasid transformatsiooni efektiivsust tõsta.
Meetodi eeliseks on eelkõige kiirus ja lihtsus. Transformatsioonisegu saab külvata tavalisele selektiivtassile, mis võimaldab kohest transformantide selektsiooni. Tänapäeval on see meetod kõige enam kasutust leidnud pärmi transformeerimise meetod. Meetod võimaldab saada 1x105 transformanti / 
g DNA kohta.
g DNA kohta.
LiAC/kandur DNA/PEG meetodi etapid:
- Rakud kasvatatkse rikkas söötmes eksponentsiaalse kasvufaasini (2 x 107 rakku/ml).
- Rakke pestakse veega ja LiAc-ga.
- Rakkudele lisatakse transformeeritav DNA, PEG, kandur DNA.
- Rakkudele tehakse kuumatöötlus 42 oC kuni 40 minutit.
- Rakud külvatakse selektiivsöötmele.
Kiireim pärmirakkude transformeerimise meetod kasutab pärmikolooniaid tassilt. Rakud inkubeeritakse LiAc, PEG, kandur DNA ja transformeeritava DNA seguga. See meetod võimaldab saada 1.1 x 104 transformanti / g DNA kohta.
g DNA kohta.