"URA-lõhkuja" meetod
"URA-lõhkuja" ("URA-blaster") meetodi töötasid välja W.A. Fonzi ja M.Y. Irwin 1993. a. Homosügootse geenideletsiooniga tüvi konstrueeritakse kahte järjestikust transformatsiooni kasutades. Alustatakse tüvest, kelle genoomist on mõlemad URA3 alleelid deleteeritud (ura3/ura3). Rakkudesse transformeeritakse DNA fragment, mis sisaldab selektsioonimarkerit ning geenist ülesvoolu ja allavoolu jäävaid homoloogilisi järjestusi (joonis 11). Selektsioonimarkerina kasutatakse C. albicans URA3 geeni, mille mõlemas otsas paiknevad Salmonella tryphimurium hisG kordusjärjestused. Transformandid selekteeritakse söötmel, millest puudub uratsiil. Heterosügootsed deletsioonimutandid külvatakse 5-fluoro-oroothapet (5-FOA) sisaldavale söötmele. Sellel söötmel jäävad ellu need rakud, kelle genoomist deleteerub URA3 geen tänu hisG järjestuste vahel toimuvale molekulisisesele rekombinatsioonile. Seejärel korratakse transformatsiooni URA3 markergeeni sisaldava DNA fragmendiga. Transformandid, kelle genoomis asendub geeni teine alleel URA3 markergeeniga, selekteeritakse söötmel, millest puudub uratsiil.
