Ekspressiooniplasmiidid (YXp)
Ekspressiooniplasmiidid (YXp) sisaldavad promootor- ja terminaatorjärjestusi ning neid kasutatakse pärmides valkude ekpresseerimiseks. Nad sisaldavad järgmisi geene ja DNA elemente (Joonis 9):
- bakteri replikatsiooni alguspunkt - ori
- bakteri selektsioonimarker - AmpR
- pärmi selektsioonimarker (URA3, LEU2, TRP1 jne.)
- polülinker - MCS
- autonoomselt replitseeruv järjestus pärmi kromosoomist - ARS element
- tsentromeerne järjestus pärmi kromosoomist - CEN element
- promootorjärjestus
- terminaatorjärjestus
![](plasmiid_9.jpg)
Joonis 9. Pärmi ekspressiooniplasmiidi kaart. AmpR,
-laktamaasi geen; ori, E. coli replikatsiooni alguspunkt; TRP1, pärmi selektsioonimarker; MCS, polülinker; ARS, pärmi autonoomselt replitseeruv järjestus; CEN, tsentromeerne järjestus; P, promootorjärjestus; T, terminaatorjärjestus.
![](eXe_LaTeX_math_1.gif)
Meid huvitava geeni cDNA, sünteetiline DNA või ilma introniteta genoomne DNA kloonitakse promootorjärjestuse ja terminaatorjärjestuse vahele.
Promootorjärjestus sisaldab transkriptsiooni initsiatsiooni järjestust ning lühikest 5'-mittetransleerivat ala. Tavaliselt ei sisalda ekspressioonivektorid ATG koodonit. Seega peab kloonitav järjestus omama ATG-d. On tähtis, et geeni alguses olev ATG oleks esimene ATG järjestus transkribeeritavas mRNA-s, sest pärmis initseeritakse valgu translatsioon tavaliselt esimeselt AUG koodonilt. Kasutades uuritava geeni enda 5'-mittetransleerivat ala peab silmas pidama, et see oleks sarnane pärmis kõrgelt ekspresseeruvate valkude mRNA 5'-mittetransleeriva järjestusega, st. puuduvad sekundaarstruktuurid, järjestus on A-rikas ja G-vaene, A asub -3 positisioonis AUG koodoni suhtes.
Pagaripärmis kasutatavaid promootoreid tutvustab õpiojekt: "Pärmigeneetika: pärmitüvede genotüübid, tüvede kasvatamiseks kasutatavd söötmed".
Terminaatorjärjestus sisaldab signaale transkriptsiooni terminatsiooniks.