Lineaarsete DNA molekulide transfomatsioon
Eksogeense lineaarse DNA molekuli, mis sisaldab pärmi homoloogilisi järjestusi, transformeerimisel pärmirakku integreerub see vastavasse kromosoomi lookusesse. Integratsioon toimub tänu homoloogilisele rekombinatsioonile.
Homoloogiline rekombinatsioon on protsess, kus kaks sarnast või identset DNA molekuli vahetavad nukleotiidseid järjestusi. Rakud kasutavad seda kaheahelalise DNA katke parandamiseks (Joonis 1). Tänu homoloogilise rekombinatsiooni toimumisele meioosis tekivad uued DNA kombinatsioonid ja geneetiline mitmekesisus.
Joonis 1. Homoloogiline rekombinatsioon: kaheahelalise DNA katke parandamine. Musta joonega on tähistatud DNA polümeraasi poolt sünteesitud uus DNA. Numbritega on näidatud Holiday struktuuri lõikekohad.
Integratsiooni efektiivsus sõltub homoloogilise järjestuse pikkusest ning lookuse omapärast. On näidatud, et 30 nukleotiidi pikkune lookuse spetsiifiline järjestus on piisav, et toimuks selle järjestuse integratsioon kromosoomi. Tavaliselt kasutatakse 50 nukleotiidi pikkust ja pikemat homoloogilist järjestust, et vältida valesid integratsioone. Lookuse omapära ei ole võimalik ette ennustada, vaid see tehakse selgeks eksperimentaalselt. Näiteks, integratsioon LEU2 lookusesse toimub 100 korda madalama sagedusega kui HIS3 regiooni. Keeruliste lookuste puhul tuleb kasutada pikemaid homoloogilisi DNA järjestusi.