Heteroloogiliste valkude ekspressioon pärmides
Valkude ekspressioon
pärmides on alternatiiviks nende valkude ekspressioonile bakerites või
valkude puhastamisele algallikast. Tänapäeval on rekombinantsete
valkude tootmine multi-miljardi-dollari suurune tootmisharu.
Pärmide kasutamine eukarüootse ekpressioonsüsteemina omab eeliseid:
- pärmid on üherakulised organismid - lihtne kasvatada ja geneetiliselt muundada
- pärmides toimub valkude protsessing (valkude pakkimine, post-translatsioonilised modifikatsioonid jne.) väga sarnaselt kõrgematele eukarüootsetele rakkudele
- pärmides puuduvad endotoksiinid ja DNA viirused (k.a. onkogeensed viirused)
- võimalik kasutada valkude sekretoorset ekspressiooni
Efektiivseks heteroloogiliste valkude ekspressiooniks pärmis on vaja välja töötada ja optimeeridada järgmised etapid:
- Ekspressiooniplasmiidi valik - on vaja saavutada kõrge ekspressioonitase (efektiivne ekspressioon ja translatsioon) ja ekspresseerunud valkude soovitud lokalisatsioon
- Ekspressioonitüve valik ja modifitseerimine, et suurendada ekspressioonitaset läbi raku füsioloogia muutmise
- Kiire, efektiivne ja kergesti korratav fermentatsioon
- Kiire ja odav produkti puhastamine