Pärmi kaksihübriidi meetodi eelised ja puudused
Pärmi kaksikhübriidi meetod on muutunud laildaselt kasutatavakse meetodiks valk-valk interaktsioonide uurimisel, sest
- suhteliselt lihtne meetod, ei vaja keerulist apratuuri
- kiiresti teostatav
- ei ole kulukas
- eelnev teadmine interakteeruvatest valkudest ei ole vajalik
- võimalik teostada ka ülegenoomilisi uuringuid
Vaatamat sellele on meetodil ka puudused:
- osa valke ei sobi selle meetodiga uurimiseks (näit. transkriptsioonifaktorid, mis võivad reportergeeni ekpressiooni aktiveerida ka ilma partnerita)
- ei ole sobilik ka valkude uurimiseks, mis sisaldvad hüdrofoobseid transmembraanseid domeene, mis takistavad nende valkude transproti tuuma
- eraldatakse vale-positiivsed st. reportergeeni transkriptsioon aktiveeritakse ilma valk-valk interaktsioonita (näit. uuritavad valgud ekspresseeritakse kõrgel tasemel, tekib mittespetsiifiline interaktsioon kuna valk on liitvalguna ning on pakkunud erinevalt, tekivad mutatsioonid, interakteeruvad valgud lokaliseeruvad rakus erinevatesse kompartementidesse jne.)
- kõiki olemasolevaid valk-valk interaktsioone ei leita üles (näit. valk/valgud ei lokaliseeru tuuma, valgud on ebastabiilsed jne.)
Pärmi kaksikhübriidi meetodi võrdlus teiste meetoditega on toodud tabelis 3.
Tabel 3. Pärmi kaksikhübriidi meetodi eelised ja puudused võrreldes teiste valk-valk interaktsioone määravate meetoditega.
Meetod |
Eelised | Puudused |
Pärmi kaksikhübriidi meetod |
lihtne ja odav, võimalik uurida ka madalalt ekspresseeruvaid valke | võimalik kirjeldada vale-positiivseid interaktsioone, valgud peavad interakteeruma tuumas |
Mass-spektroskoopia |
saab kindlaks teha valgulisi komplekse |
reeglina on vajalik kompleksi eelnev puhastamine, mis teeb meetodi kalliks ning ajakulukaks |
In vivo sidumine |
kindlaksmääratud tingimused |
tavaliselt kasutatakse mittefüsioloogilisi tingimusi |
Valgu mikrokiibid (chip) | kindlaksmääratud tingimused, võimalik analüüsida palju ja paralleelselt |
vajalik on valkude eelnev puhastamine |