Biolistiline meetod

 
Biolistiline transformatsiooni meetod töötati esmalt välja taimerakkude transforeerimiseks 1987. a. Pärmirakke transfomreeeriti seda meetodit kasutades 1988. a. Rakud külvatakse selektiivtassile ning "pommitatakse" 0.5 m läbimõõduga ning DNA-ga kaetud kulla või volframi osakestega. Kasutatakse geeni püssi ("gene gun", http://en.wikipedia.org/wiki/Gene_gun), näiteks PSD-1000/HE Particle Delivery System. Rõhk süsteemis tekitatakse kokku surutud heeliumiga. Meetodi efektiivsuseks on 104 kuni 105 transformanti / g plasmiidse DNA kohta.
 
Biolistiline meetod on ainus meetod, mille abil saab võõr-DNA viia ka pagaripärmi mitokondrisse. Sel juhul kaetakse kullaosakesed kahe plasmiidse DNA seguga. Üks plasmiid sisaldab selektsioonimarkerit (näiteks URA3), mis võimaldab selekteerida rakke, kuhu on võõr-DNA sisse läinud. Teine plasmiid sisaldab transformeeritavat DNA-d, mida soovitakse mitokondrisse viia. Kasutatakse respiratoorselt defektset pärmitüve, kelle genoomis on auksotroofne mutatasioon (näiteks ura3-52). Esmalt seleteeritakse kolooniad kus markergeen komplementeerib auksotroofse mutatasiooni (näiteks Ura+ kolooniad). Kuna mitokondrisse transformeeritav DNA taastab raku võime hingata, siis saab selekteerida töötava mitokondriaalse DNA-ga transformandid mittefermenteeritavat süsiniku allikat sisaldaval söötmel.
 
Mitokondri transformatsioon on väga ebaefektiivne. Näiteks 3600 Ura+ koloonia hulgast leiti 6 respiratoorselt kompetentset kolooniat. Seega on mitokondri transformatsiooni efektiivsuseks 2 x 10-3 kuni 10-4 mitokondri transformanti / tuumagenoomi transformandi kohta.