Kahe-etapiline geeni deletsioon
Kahe-etapilise geeni deletsiooni meetodi töötasid välja Scherer ja Davis 1979. a. Pärmigenoomi integreeritakse plasmiid, mis sisaldab mutantset deletsiooniga alleeli. Sellise järjestuse lookusesse integratsioonil toimub regiooni duplikatsioon. Kromosoomis on nüüd metsiktüüpi alleel ja mutantne deletsiooniga alleel koos plasmiidi järjestusega. Homoloogiline rekombinatsioon duplitseerunud koopiate vahel viib plasmiidse järjestuse kadumiseni. Kaob ka üks alleeli koopia. Osades rakkudes jääb alles metsiktüüpi alleel, teistes jälle mutantne deletsiooniga alleel. Tavaliselt kasutatakse integratsiooniplasmiidi, mis sisaldab URA3 markergeeni. URA3 markergeeni on võimalik selekteerida nii poolt kui ka vastu. Söötmel, mis sisaldab 5-fluoro-oroothapet (5-FOA) jäävad ellu vaid need rakud, kes on kaotanud plasmiidse järjestuse ja seega ka ühe alleelidest.
Joonis 5. Kahe-etapiline geeni deletsiooni meetod.
Kahe-etapilist geeni deletsiooni meetodit kasutades on võimalk saada kaks pärmitüve - üks neist sisaldab metsiktüüpi alleeli, teine geeni deletsiooni. Muus osas on need tüved geneetiliselt identsed.