Biosensori konstrueerimine biogeensete amiinide määramiseks
Date
2007-05-22T09:12:55Z
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Abstract
Käesoleva töö eesmärgiks oli iseloomustada herneidudest eraldatud amiini oksüdaasi (PSAO, EC 1.4.3.6) aktiivsust erinevate amiinsete substraatide suhtes; immobiliseerida eraldatud ensüüm nailonniidile ning uurida biogeensete amiinide mõju amiini oksüdaasil baseeruva amperomeetrilise biosensori väljundvoolu parameetritele, eesmärgiga luua biosensor biogeensete amiinide määramiseks, kus bioselektiivse elemendina oleks kasutusel herneidudest puhastatud ensüüm.
Amiini oksüdaasi eraldamiseks kasutati kolmeetapilist puhastusprotsessi - homogeniseerimine, sadestamine ja erinevate kromatograafiliste meetodite kasutamine. Eraldatud ensüümi aktiivsust erinevate amiinsete substraatide suhtes määrati amperomeetriliselt Clark´i tüüpi hapnikuanduri abil ning saadud parameetrite alusel arvutati välja Ks väärtused erinevate substraatide jaoks. Ensüümi aktiivsus määrati alifaatsete diamiinide ja monoamiini ning aromaatsete amiinide suhtes. Selgus, et herneidudest eraldatud amiini oksüdaas on selektiivne 1,5-diaminopentaani (ehk kadaveriin) ja 1,4-diaminobutaani (ehk putresiin) suhtes. Neid amiine võime leida toiduainetes, milles on hakanud toimuma roiskumis- või käärimisprotsessid.
Eraldatud ensüüm immobilseeriti kandjale, milleks kasututati nailonit. Immobiliseerimiseks kasutati kahte meetodit – sidumist dimetüülsulfaadi (DMS) ja glutaaraldehüüdi abil, kusjuures stabiilsem ensüüm saadi glutaaralhehüüdiga immobiliseerides.
Biosensoriga mõõdeti erinevatel temperatuuridel ja aegadel kogutud hõbeheigi proovides biogeensete amiinide (kadaveriin ja putresiin) sisaldust - HPLC meetodil ning solubiliseeritud ja immobiliseeritud ensüümiga. Lisaks uuriti ka kadaveriini ja putresiini koosmõju reaktsiooni väljundsignaalile.
Description
Keywords
amiini oksüdaas, biogeensed amiinid, biosensor, immobiliseerimine, nailon, kala, amine oxidase, bigenic amines, biosensor, immobilization, nylon, fish