Eukarüootse valgukompleksi Cbf5-Gar1-Nop10-Nhp2 puhastamine ja aktiivsuse kontroll in vitro pseudouridülatsioonil
Kuupäev
2022
Autorid
Ajakirja pealkiri
Ajakirja ISSN
Köite pealkiri
Kirjastaja
Tartu Ülikool
Abstrakt
Käesoleva töö eesmärk oli puhastada välja pseudouridülatsiooni teostava Saccharomyces
cerevisiae-st pärit H/ACA ribonukleoproteiin-kompleksi valgud ja testida kompleksi aktiivsust
in vitro pseudouridülatsioonil.
Kompleksi moodustamiseks optimeeriti valkude ekspressioon E. coli ekspressioonitüvedes,
puhastati valgud afiinsuskromatograafia meetoditega ning sünteesiti kompleksi kuuluv giid RNA ja pseudouridülatsioonireaktsiooni substraat-RNA kasutades in vitro transkriptsiooni.
Moodustatud kompleksi aktiivsust hinnati triitiumi vabanemise kaudu, kasutades triitiumiga
märgitud substraat-RNA-d.
Kirjeldus
Märksõnad
RNA modifikatsioonid, pseudouridiin, H/ACA RNP, valguekspressioon, afiinsuskromatograafia