Browsing by Author "Kasari, Marje"

Filter results by typing the first few letters
Now showing 1 - 1 of 1
  • Thumbnail Image
    Item
    Bisubstrate luminescent probes, optical sensors and affinity adsorbents for measurement of active protein kinases in biological samples
    (2012-02-15) Kasari, Marje
    Proteiinkinaasid osalevad paljudes rakusisestes signaaliülekanderadades. Kõrvalekalded proteiinkinaaside aktiivsuse normaalsest tasemest võivad viia mitmete raskete haiguste tekkeni. Teadmine, et protiinkinaaside aktiivsust on võimalik reguleerida madalmolekulaarsete ühendite abil, on muutnud proteiinkinaasid oluliseks ravimiarenduse sihtmärgiks, eriti vähiravimite väljatöötamisel. Haiguste tekkel oluliste kinaaside identifitseerimisel on vajalikud analüüsimeetodid, mis võimaldavad tuvastada proteiinkiniaaside aktiivsuse muutust patsientide koeproovides. Teisalt on kinaaside kiired ja odavad analüüsimeetodid vajalikud haiguste diagnoosimiseks nende varajases staadiumis. Käesoleva doktoritöö eesmärgiks oli meetodite arendamine aktiivsete proteiinkinaaside hulga määramiseks koeproovides. ARC-tüüpi bisubstraatsete inhibiitorite immobiliseerimisel saadi afiinsusadsorbendid ja sensorpinnad, mis võimaldasid proteiinkinaaside kontsentreerimist bioloogilistest proovidest ning nende kinaaside iseloomustamist pinna plasmonresonantsspektoskoopiat kasutades. Järgnevalt töötati välja üheetapiline meetod proteiinkinaaside määramiseks otse koeproovides. Töö käigus avastati, et mõnede ARC-tüüpi ühendite (ARC-Lum) kompleksid proteiinkinaasidega omavad varemkirjeldamata optilisi omadusi. Nende komplekside ergastamisel kiirgusega lähis-UV alas emiteerivad nad punases spektriosas valgust, mille sumbumise poolestusaeg on vahemikus 14-170 mikrosekundit, 10000 korda pikem kui tavalistel fluorestsentsvärvidel. Töötati välja ülitundlik ARC-Lum-sondide kasutamisel põhinev meetod vähi biomarkeri, rakuvälise PKAc (ECPKA), määramiseks inimese vereplasmas. Väljatöötatud meetod on üheetapiline, automatiseeritav, odav, teostatav levinud aparatuuri kasutades ning võimaldab mõõta pikomolaarseid ECPKA kontsentratsioone eeltöötlemata plasmaproovides.