Sirvi Kuupäev , alustades "2011-04-12" järgi

Filtreeri tulemusi aasta või kuu järgi

Nüüd näidatakse 1 - 1 1

Studies on the role of helix 69 of 23S rRNA in the factor-dependent stages of translation initiation, elongation, and termination
(2011-04-12) Kipper, Kalle;
Käesoleva doktoritöö eesmärgiks oli selgitada i) ribosomaalse 23S rRNA heeliksi 69 võimalikku rolli valgusünteesi faktorkatalüüsitud etappides ning ii) heeliksis 69 sisalduvate pseudouridiinide rolli translatsiooni terminatsioonil. Lisaks on töös selgitatud ka pseudouridiini süntaasi RluD substraadispetsiifilisust määravaid tegureid. Doktoritöö alguseks oli kogunenud märkimisväärne hulk struktuuripõhiseid viiteid heeliksi 69 osaluses kohta erinevates ribosoomi töötsükli osades. Käesoleva doktoritöö eesmärgiks oligi nende struktuuripõhiste hüpoteeside biokeemiline kontrollimine. Töö eksperimentaalses osas asendati suunatud mutageneesi abil heeliksi 69 valitud positsioonides olevad natiivsed lämmastikalused teiste lämmastikalustega. Variantsed ribosoomid ekspresseeritid E.colis, affiinsuspuhastati ning nende ribosoomide aktiivsust analüüsiti erinevates in vitro katsesüsteemides. Katsetest saadud tulemused osutavad, et 23S rRNA heeliks 69 osaleb initsiatsioonifaktorite aktiivsuse regulatsioonis 70S initsiatsioonikompleksi moodustumisel ning et heeliks 69 on oluline ribosoomi üleminekul initsiatsioonifaasist protsessiivse elongatsiooni faasi. Pseudouridiinide eemaldamine heeliksist 69 pärssis peptiidi vabastamist polüpeptiidi vabanemisfaktori RF2 poolt, kuid ei mõjutanud RF2-ga struktuurilt väga sarnase vabanemisfaktori RF1 aktiivsust. See tulemus osutab erinevustele RF1 ja RF2 katalüüsimehhanismis. Lisaks osutavad meie tulemused, et pseudouridiini süntaasi RluD spetsiifikat heeliksi 69 suhtes suunab heeliksi 69 positsioonis 1916 asuv nukleotiid.