Sirvi Kuupäev , alustades "2011-05-18" järgi

Filtreeri tulemusi aasta või kuu järgi

Nüüd näidatakse 1 - 2 2

Delivery of nucleic acids by cell-penetrating peptides: application in modulation of gene expression
(2011-05-18) Lehto, Taavi
Viimaste aastakümnete teaduslike saavutuste abil on loodud suur hulk erinevaid meetodeid, mis võimaldavad reguleerida geeniekspressiooni. Enamik geeniekspressiooni mõjutamiseks kasutatavaid molekule põhinevad nukleiinhapetel (NH-del) ja nende analoogidel, varieerudes lühikestest oligonukleotiididest (ON) kuni suurte plasmiidse DNA (pDNA) molekulideni. Oma füsikokeemilistest omadustest tingituna ei ole need molekulid ise võimelised bioloogilisi membraane läbima ning oma toimekohtadeni jõudmiseks vajavad nad transportvektorite abi. Rakku sisenevad peptiidid (RSP-d) on üks grupp mitteviiruslikke transportvektoreid, mis on leidnud laialdast kasutust alates nende avastamisest 1994. a. RSP-d on katioonsed ja/või amfipaatsed peptiidid, mis koosnevad 5–40 aminohappest ning on võimelised rakkudesse transportima erinevaid bioloogiliselt aktiivseid kargomolekule, nende hulgas pDNA-d, splaissingut korrigeerivaid ON-e (SKO) ja väikeseid interfereeruvaid RNA-sid (siRNA), seda nii in vitro kui in vivo tingimustes. Käesoleva töö eesmärk oli disainida ja iseloomustada uusi RSP-del põhinevaid vektoreid, mis moodustaksid mitte-kovalentselt nanopartikleid erinevate NH-del põhinevate molekulidega, seal hulgas pDNA-d geenide transportimiseks, SKO-sid splaissingu moduleerimiseks ning siRNA-sid geeniekpressiooni vaigistamiseks. Modifikatsioonidena lisasime RSP-dele stearhappe ja/või uudse endosomotroopse modifikatsiooni või muutsime RSP aminohappelist järjestust. Kokkuvõttes moodustavad kirjeldatud peptiidid mitteviiruslike transportvektorite platvormi erinevate NH-del ja nende analoogidel põhinevate molekulide transpordiks, mida saab kasutada geeniteraapia eesmärkidel ning geeniekpressiooni moduleerimisel, nii in vitro kui in vivo tingimustes.
Characterization of cell-penetrating peptides: assessment of cellular internalization kinetics, mechanisms and bioactivity
(2011-05-18) Mäger, Imre
Üha enam uusi farmakoloogiliselt huvipakkuvaid molekule või ravimikandidaate, näiteks oligonukleotiidid ja terapeutilised valgud, omavad toimet rakusiseses keskkonnas. Paraku enamik neid molekule ei suuda ilma vastavate transportvektorite abita rakumembraani ületada ega jõua seega oma sihtmärkideni. Erinevaid võimalikke transportsüsteeme, millega nende molekulide rakkudesse jõudmist parandada, on mitmeid. Nendest üheks on rakkusisenevad peptiidid (RSP-d). Nende lühikeste amfipaatsete/katioonsete peptiidide rakkudesse sisenemise mehhanismid on aga siiani arutluse all. Mehhanisme tuleb täpselt tunda, kuna rakkudesse sisenemise tee võib sõltuda näiteks RSP tüübist, sellega seondunud lastmolekulist, uuritava rakutüübi membraani koostisest ja sihtmärgiks olevast raku piirkonnast. Käesolevas doktoritöös on kirjeldatud mitme erineva laialdaselt kasutusel oleva RSP tsütoplasmasse jõudmise kineetikat ja mehhanisme, kasutades fluorestsentsi kustutamisel ja bioluminestsentsil põhinevat meetodit. On püstitatud hüpotees, et erinevad sisenemisteed võivad üksteist kompenseerida, mistõttu on RSP-de mehhanismide uurimisel kineetilised mõõtmised informatiivsemad kui ühes ajapunktis sooritatud eksperimendid. Me leidsime, et teatud juhtudel mõjutab kindlate endotsütoosiradade inhibeerimine ainult RSP-de rakkudesse sisenemise kineetilist profiili, kuid mitte nende summaarset sisenemist (või vastupidi). Erinevat tüüpi RSP-de sisenemisprofiilid võivad olla väga erinevad, meenutades teatud juhtudel isegi rakumembraane vabalt läbivaid väikseid molekule. Sellest hoolimata sõltub kõikide testitud RSP-de rakkudesse jõudmine väga tugevalt endotsütoosi inhibiitoritest. Sellest tulenevalt võib järeldada, et erinevad rakkudesse sisenemise teed on samaaegselt aktiivsed. Lisaks, kasutades rakkusisenevat tsütokroom c sarnast peptiidi, näitasime, et loomuomase aktiivsusega RSP-de disainimine võib olla edukas viis suurendamaks RSP-de rakendusalasid.