G1-faasi tsükliinist sõltuva kinaasi kompleksi Cln2-Cdk1 substraatide valiku mehhanismid

Abstract

Saccharomyces cerevisiae Cdk1 reguleerib erinevate valkude fosforüleerimise kaudu kogu rakutsükli toimimist. Eri aegadel seondub Cdk1 erinevate tsükliinidega. Mitmed Cdk1 substraadid on enim fosforüleeritud G1-faasis, mil Cdk1 on kompleksis tsükliiniga Cln2. Käesolevas töös uuriti, mis mehhanismid võimaldavad Cln2-spetsiifilist fosforüleerimist. Esmalt leiti, et mitmete Cln2-Cdk1 substraatide fosforüleerimine ei vaja varem kirjeldatud LP-seondumist. Substraatide Sli15, Bud2 ja Rtt109 uurimisel selgus, et Cln2-Cdk1- vahendatud fosforüleerimist soodustavad lüsiini- või arginiinijääkide rikkad seondumismotiivid (KR-motiiv), millest tugevaima mõjuga on α-heeliksid, milles on vähemalt kolm positiivselt laetud aminohappejääki järjestikku heeliksi ühel küljel. Lisaks leiti Cln2 mutandid, millel on vähenenud spetsiifiline aktiivsus, ning näidati LP- ja KR-motiivide osalust polariseeritud kasvus. Veel näidati, et Cln2-Cdk1 reguleerib Sli15 paiknemist KRseondumise abil.