Eukarüootse valgukompleksi Cbf5-Gar1-Nop10-Nhp2 puhastamine ja aktiivsuse kontroll in vitro pseudouridülatsioonil
Date
2022
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Tartu Ülikool
Abstract
Käesoleva töö eesmärk oli puhastada välja pseudouridülatsiooni teostava Saccharomyces
cerevisiae-st pärit H/ACA ribonukleoproteiin-kompleksi valgud ja testida kompleksi aktiivsust
in vitro pseudouridülatsioonil.
Kompleksi moodustamiseks optimeeriti valkude ekspressioon E. coli ekspressioonitüvedes,
puhastati valgud afiinsuskromatograafia meetoditega ning sünteesiti kompleksi kuuluv giid RNA ja pseudouridülatsioonireaktsiooni substraat-RNA kasutades in vitro transkriptsiooni.
Moodustatud kompleksi aktiivsust hinnati triitiumi vabanemise kaudu, kasutades triitiumiga
märgitud substraat-RNA-d.
Description
Keywords
RNA modifikatsioonid, pseudouridiin, H/ACA RNP, valguekspressioon, afiinsuskromatograafia