Ewingella americana N-atsetüülheksoosaminidaasi EaNah20 katalüüsivõime ja temperatuuristabiilsuse kindlakstegemine ning valitud mutatsioonide mõju hindamine ensüümi biokeemilistele omadustele
Kuupäev
2022
Autorid
Ajakirja pealkiri
Ajakirja ISSN
Köite pealkiri
Kirjastaja
Tartu Ülikool
Abstrakt
N-atsetüülglükoosamiini või N-galaktoosamiini sisaldavad molekulid on looduses laialt levinud
esinedes näiteks kitiinis ning need on olulised nii rakkude füsioloogias kui ka biotehnoloogias.
N-atsetüülheksoosaminidaasid (Nah-id) on ensüümid, mis lagundavad glükosiidsidet N atsetüülitud suhkrutes. Bakalaureusetöö põhieesmärk oli kindlaks teha bakteriaalse Nah-i
EaNah20 kineetilised parameetrid ja temperatuuristabiilsus ning hinnata valitud
punktmutatsioonide mõju ensüümi omadustele. Töös tehti kindlaks, et puhastatud EaNah20 on
kõrge katalüütilise aktiivsusega, selle afiinsus sünteetilise substraadi suhtes on 0.35 mM ja
ensüüm on stabiilne kuni temperatuurini 50°C. Aspartaadi asendus valgu positsioonis 166
inaktiveeris ensüümi. Proliini asendus positsioonis 248 vähendas ensüümi katalüütilist
efektiivsust 25 korda ja alandas temperatuuristabiilsust ligi 6°C võrra.
Kirjeldus
Märksõnad
glükosiidi hüdrolaas, N-atsetüülglükoosaminidaas, katalüütiline aktiivsus, kitiini oligosahhariidid, temperatuuri mõju, struktuuri ja funktsiooni seosed