Ewingella americana N-atsetüülheksoosaminidaasi EaNah20 katalüüsivõime ja temperatuuristabiilsuse kindlakstegemine ning valitud mutatsioonide mõju hindamine ensüümi biokeemilistele omadustele
Date
2022
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Tartu Ülikool
Abstract
N-atsetüülglükoosamiini või N-galaktoosamiini sisaldavad molekulid on looduses laialt levinud
esinedes näiteks kitiinis ning need on olulised nii rakkude füsioloogias kui ka biotehnoloogias.
N-atsetüülheksoosaminidaasid (Nah-id) on ensüümid, mis lagundavad glükosiidsidet N atsetüülitud suhkrutes. Bakalaureusetöö põhieesmärk oli kindlaks teha bakteriaalse Nah-i
EaNah20 kineetilised parameetrid ja temperatuuristabiilsus ning hinnata valitud
punktmutatsioonide mõju ensüümi omadustele. Töös tehti kindlaks, et puhastatud EaNah20 on
kõrge katalüütilise aktiivsusega, selle afiinsus sünteetilise substraadi suhtes on 0.35 mM ja
ensüüm on stabiilne kuni temperatuurini 50°C. Aspartaadi asendus valgu positsioonis 166
inaktiveeris ensüümi. Proliini asendus positsioonis 248 vähendas ensüümi katalüütilist
efektiivsust 25 korda ja alandas temperatuuristabiilsust ligi 6°C võrra.
Description
Keywords
glükosiidi hüdrolaas, N-atsetüülglükoosaminidaas, katalüütiline aktiivsus, kitiini oligosahhariidid, temperatuuri mõju, struktuuri ja funktsiooni seosed