Alfaviiruse-põhise trans-replikatsiooni süsteemi kasutamine swap- ja punktmutatsioonide uurimisel
Date
2016
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Tartu Ülikool
Abstract
Trans-replikaasi süsteem põhineb matriits-RNA replikatsioonil ja sellelt toimuval
subgenoomse RNA sünteesil (transkriptsioonil) imetajarakkudes, mida teostab samas rakus
eraldi ekspresseeritud alfaviiruse replikaas. Replikatsiooni ja transkriptsiooni hinnatakse
matriits-RNA-l kodeeritud markervalkude detekteerimisega. Käesoleva töö tulemused
näitasid, et trans-replikaasi süsteem osutus väga informatiivseks alfaviiruste homoloogsete
replikaasi domeenide vahetamise mõju uurimisel ning nsP2 proteaasi punktmutatsioonide
efektide uurimisel. Uurimusest selgus, et domeenide vahetamine pärssis transkriptsiooni,
osutades replikaasi valkude antud domeenide olulisusele transkriptsiooni jaoks. Valitud
punktmutatsioonid nsP2 proteaasis blokeerisid täielikult replikatsiooni ja transkriptsiooni,
millest järeldub, et proteaasne aktiivsus on oluline nii replikatsiooni kui transkriptsiooni
jaoks.
Description
Keywords
Trans-replikaasi süsteem, punktmutatsioonid, swap-mutatsioonid