Juhuslike spooride analüüs
Juhuslike spooride analüüsil eraldatakse kõik ristamissegus olevad spoorid, külvatakse rikkale söötmele, lastakse idaneda ning analüüsitakse moodustunud kolooniate fenotüüpe.
Poolduva pärmi juhuslike spooride analüüs on lihtne ja kiire meetod,
sest vegetatiivsed (mittesporuleerunud) rakud on kergesti surmatavad ning poolduva pärmi spoorid ei kleepu üksteise
külge.
Pagaripärmi puhul on juhuslike
spooride analüüs mõnevõrra raskendatud kuna spoorid on omavahel suhteliselt
tugevalt seotud ning üksikute spooride saamine pole väga lihtne. Samuti on vaja
rakendada spetsiaalseid selektsioonitingimusi, et diploidsetest rakkudest
vabaneda. Sellest tulenevalt on pagaripärmi puhul mõistlik kasutada spooride tetraadide analüüsi, mille käigus eraldatakse
spoorid spetsiaalse mikromanipulaatoriga varustatud mikroskoobi all.
Juhuslike spooride analüüsi eelised ja kasutamine:
- võimalik on uurida suurt hulka järglasi kiiresti ja vähese vaevaga
- kasutatakse kaksikmutantide tegemisel kui erinevate mutatsioonide poolt põhjustatud fenotüübid on kergesti jälgitavad (näit. üks on temperatuuritundlik, teine ei kasva mitte-fermenteeritaval süsiniku allikal)
- kasutatakse juhul kui kaks mutatsiooni on aheldunud ning kaksikmutandi saamine nõuab suure hulga spooride analüüsi
- kasutatakse ahelduvuse määramiseks kui on vaja analüüsida palju ristamisi üheaegselt
Juhuslike spooride analüüsi ei saa kasutada kui:
- spooride idanevus on halb
- ristamisel kasutatud mutantide fenotüübid on üksteisest raskesti eristatavad (näit. kui ristatakse omavahel kaks temperatuuritundlikku mutanti ning soovitakse saada kaksikmutanti)