Sirvi Autor "Enno, Rasmus" järgi

Tulemuste filtreerimiseks trükkige paar esimest tähte
Nüüd näidatakse 1 - 2 2
  • Pisipilt
    listelement.badge.dso-type Kirje ,
    Kullerpeptiidi retseptori identifitseerimine lähiligeerimise meetodil
    (Tartu Ülikool, 2025) Enno, Rasmus; Teesalu, Tambet, juhendaja; Põšnograjeva, Kristina, juhendaja; Sedman, Juhan, juhendaja; Tartu Ülikool. Loodus- ja täppisteaduste valdkond; Tartu Ülikool. Molekulaar- ja rakubioloogia instituut
    Vaskulaarsed endoteelirakud avaldavad erinevaid omadusi sõltuvalt koe füsioloogilisest seisundist. Nende rakkude pinnaretseptorite sihtmärgistamiseks on välja töötatud vaskulaarsed kullerpeptiidid (ingl. vascular homing peptides, VHP), mida avastatakse in vivo faagidisplei abil. Kuna faagidisplei ei võimalda retseptorite kohest tuvastamist, kasutatakse nende leidmiseks sageli afiinsuskromatograafiat. Selle protsessi oluline etapp on rakkude lüüs, mille käigus vabanevad rakusisesed valgud, mis võivad häirida VHP-de seondumist sihtvalkudega, vähendades märgistamise spetsiifilisust. Selle piirangu ületamiseks töötati käesolevas töös välja mädarõika peroksüdaasist (HRP) sõltuv, VHP-ga suunatud lähiligeerimise meetod, mis võimaldab märgistada peptiidi läheduses paiknevaid valke elusrakkudes. Mudelsüsteemina kasutati kullerpeptiidi järjestusega RPARPAR (RPAR) ja selle retseptorit neuropiliin-1 (NRP-1). RPAR-HRP konjugaat võimaldas NRP-1 positiivsete rakkude selektiivset märgistamist AlexaFluor 647-türamiidi ja biotiin-türamiidiga. Märgistatud rakupinnavalgud isoleeriti afiinsuskromatograafia abil ning NRP-1 tuvastati Western blot’i ja massispektromeetrilise analüüsi kaudu. Antud töö tulemused näitavad, et VHP-ga juhitud lähiligeerimine on toimiv strateegia kullerpeptiidide sihtretseptorite tuvastamiseks terviklikel elusrakkudel.
  • Pisipilt
    listelement.badge.dso-type Kirje ,
    Pagaripärmi valgu Whi7 puhastamine bakterist Escherichia coli
    (Tartu Ülikool, 2023) Enno, Rasmus; Tartu Ülikool. Loodus- ja täppisteaduste valdkond; Tartu Ülikool. Molekulaar- ja rakubioloogia instituut
    Käesoleva töö eesmärgiks on kloneerida pagaripärmi (Saccharomyces cerevisiae) valgu Whi7 geen bakteri Escherichia coli ekspressioonivektorisse ning välja töötada valgu Whi7 puhastamisprotokoll bakterist Escherichia coli. Valgu puhastamiseks kloneeriti pärmi Saccharomyces cerevisiae Whi7 geen bakteriaalsesse ekspresioonivektorisse ning transformeeriti saadud plasmiid E. coli ekspressioonitüvesse. Seejärel ekspresseeriti valku ekspressioonitüvedes ning viidi läbi valgu puhastamine denatureerivatel tingimustel kasutades immobiliseeritud metalli afiinsuskromatograafiat. Seejärel viidi läbi dialüüs valgu renatureerimiseks ning määrati valgu kontsentratsioon.