Rakuvaba valgusünteesi rakendamine inimese neuroblastoomi SH-SY5Y rakuliinis
Date
2021
Authors
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Tartu Ülikool
Abstract
Bakalaureuse töö eesmärk oli luua inimese neuroblastoomi rakuliini SH-SY5Y kasutades
mudelsüsteem erinevate RNA-d siduvate valkude ja komplekside uurimiseks, et neid oleks
võimalik välja puhastada ja kasutada struktuuribioloogilistes uuringutes. Töö käigus töötati
välja metoodika SH-SY5Y rakuliinist translatsiooniekstrakti eraldamiseks ning ekstrakte
kasutades leiti in vitro valgusünteesiks K
+
, Mg2+ ja mRNA optimaalsed tingimused.
Tulemustest selgus, et G3BP-2 seostus mRNA külge ja ei oma endonukleaasset aktiivsust.
Valgud G3BP-2 ja Caprin-1 langetasid koosmõjul valgusünteesi aktiivsust rohkem kui ainult
G3BP-2-te kasutades, seejuures Caprin-1 valgusünteesile märgatavat mõju ei avaldanud.
Western Blot meetod näitas, et translatsiooniekstraktile lisatud G3BP-2 ja Caprin-1 olid
üleesindatud 40S subühikuid sisaldavas fraktsioonis.
Description
Keywords
Ribosoom, neuroblastoom, RNA, valk