Hansenula polymorpha rekombinatiivse helikaasi Irc3 ekspressioon, puhastamine ja aktiivsuse võrdlus Saccharomyces cerevisiae Irc3-ga

Abstract

H. polymorpha on termotolerantne metülotroofne pärmseen, mille optimaalne kasvutemperatuur on 45 C (Levine ja Cooney, 1973) ning mis sobib hästi rekombinantsete valkude tootmiseks (Hollenberg ja Gellissen, 1997). Irc3 on mitokondriaalne helikaas, mis on oluline mitokondriaalse DNA säilitamisel (Sedman jt., 2014). Antud töö eesmärgiks oli ekspresseerida ja puhastada H. polymorpha Irc3 helikaas ning viia läbi ATPaasse aktiivsuse mõõtmised erinevatel temperatuuridel, et vaadata võimalikku temperatuuri mõju Irc3 valgu aktiivsusele. Samad katsed viidi läbi ka S. cerevisiae Irc3-ga. Katsete tulemusena selgus, et H. polymorpha Irc3 valgul esines ATPaasset aktiivsust veel ka 42 C juures, kuid S. cerevisiae valgul mitte. See näitas, et H. polymorpha Irc3 valk on termostabiilsem võrreldes S. cerevisiae Irc3-ga.