Renilla ja firefly lutsiferaasidel põhinev in vivo reportersüsteem translatsiooni analüüsimiseks pagaripärmis Saccharomyces cerevisiae

Abstract

Ribosoomid on valkudest ja RNA-st koosnevad makromolekulaarsed masinad. Ribosoomide elongatsioonikiiruse ja protsessiivsuse määramiseks in vitro kasutatakse Renilla ja firefly lutsiferaaside liitvalgust koosnevat reportersüsteemi. Käesoleva töö eesmärgiks oli välja töötada sarnane kahel lutsiferaasil põhinev reportersüsteem, mida saaks kasutadada ribosoomide translatsiooni hindamiseks in vivo. Selleks konstrueeriti pärmigenoomi integreeritavad plasmiidid, mis sisaldasid lutsiferaaside reportereid Rluc-Fluc ja Rluc-2xSNF7-Fluc. Nende plasmiidide viimisel pärmigenoomi saadi tüved, mida kasutati ribosoomide elongatsioonikiiruse analüüsimiseks.