Galaktoosi oksüdaasi ja laktaadi oksüdaasi eraldamine ja puhastamine

Abstract

Käesoleva bakalaureusetöö eesmärgiks oli optimeerida puhastusmeetodeid ensüümide galaktoosi oksüdaasi (EC. 1.1.3.9) ja laktaadi oksüdaasi (EC.1.13.12.4) eraldamiseks ja puhastamiseks jogurtikultuurist YC-X11 (S. thermophilus ja L. bulgaricus). Bakterikultuuri kasvatati 24 tundi 37°C juures 2%-lises Luria-Bertani (LB) vedelsöötmel, seejärel homogeniseeriti proovi 0,015% Triton X-100 lahusega ning saadud ekstrakt süstiti DEAE FF 16/10 anioonvahetuskolonni. Ensüümide aktiivsuste määramiseks kasutati amperomeetrilist Clark´i tüüpi hapnikuandurit. Galaktoosi oksüdaasi ja laktaadi oksüdaasi saagisteks saadi vastavalt 7% ja 6%. Galaktoosi oksüdaas ja laktaadi oksüdaas elueerusid kolinnist ühe faktsiooninakui puhverlahuse ioonne jõud oli 0,66 M.