Assessment of lipid nanoparticle-mediated Cre mRNA delivery in cancer cell lines

Abstract

Lipiidsed nanoosakesed (LNP-d) on paljulubavad mitteviiruslikud mRNA ja plasmiidse DNA (pDNA) rakusiseseks kohaletoimetamiseks. Rakku penetreerivad peptiidid (CPP-d) ja koesse tungivate peptiididega (TPP-dega) funktsionaliseeritud LNP-d võivad parandada nukleiinhapete rakulist omastamist ja rakusisest transporti. Käesoleva bakalaureusetöö eesmärk oli hinnata CPP-põhiste transfektsioonisüsteemide ja TPP-funktsionaliseeritud LNP-de võimet vahendada funktsionaalset geeniedastust erinevates vähirakkude liinides. Töös kasutati kahekordset Cre reportersüsteemi sisaldavat pDNA konstrukti. Transfekteeritud rakud ekspresseerisid punast fluorestseeruvat valku (RFP), kuid Cre-vahendatud loxP-ga ümbritsetud RFP-STOP kasseti eemaldamine põhjustas fluorestsentsi muutuse RFP-st roheliseks fluorestseeruvaks valguks (GFP). VP1 ja VP4 CPP-sid hinnati pDNA kohaletoimetamise transfektsioonireagentidena, samal ajal kui longCP- ja RPAR-funktsionaliseeritud LNP-sid kasutati Cre mRNA rakusiseseks kohaletoimetamiseks. pDNA ja Cre mRNA kohaletoimetamist ning reportersüsteemi aktivatsiooni hinnati fluorestsentsmikroskoopia ja läbivoolutsütomeetria abil. Kõige tugevamat ja püsivamat Cre reportersignaali täheldati longCP-funktsionaliseeritud LNP-de kasutamisel pärast VP4-vahendatud pDNA transfektsiooni. Käesolev töö näitab CPP-de ja TPP-funktsionaliseeritud LNP-de potentsiaali LNP-vahendatud kohaletoimetamissüsteemide in vitro hindamisel enne nende kasutamist in vivo katsetes.