Saccharomyces cerevisiae helikaasi Irc3 ekspresseerimine E.coli BL 21 RIL tüvedes ja puhastatud valgu funktsionaalne analüüs

Abstract

Irc3 ensüüm on DExH/D-box klassi kuuluv pärmi mitokondriaalne DNA helikaas, mis on vajalik S. cerevisae mitokondriaalse DNA terviklikkuse säilitamiseks. Antud töö eesmärk oli leida optimaalsed tingimused, mille juures ekspresseerida Irc3 sünteesi, puhastada välja Irc3 helikaas ning viia läbi ATPaasse aktiivsuse mõõtmised puhastatud valgupreparaadiga, et vaadata, kas antud valgul on säilinud aktiivsus in vitro tingimustes. Tööst selgus, et optimaalsed tingimused, mille juures Irc3 sünteesi ekspresseerida, oli 20ᴼC, OD 0,4 ja 4h ning antud tingimustel ekspresseeritud ja välja puhastatud Irc3 helikaasi aktiivsus säilib in vitro tingimustes.