Noble & Johnson geenideletsiooni meetod
S.M. Noble ja A.D. Johnsoni poolt 2005.a. välja töötatud geenideletsiooni meetod kasutab rakkude transformeerimisel DNA fragmente, mis sisaldavad pikki (~350-500 nukleotiidi pikkuseid) geenist ülesvoolu ja allavoolu jäävaid homoloogilisi järjestusi. Need DNA fragmendid paljundatakse kasutades liit-PCR ("fusion PCR") meetodit (joonis 9). Esimeses etapis paljundatakse lookuse spetsiifilised järjestused ja selektsioonimarker. Viiakse läbi kolm eraldi reaktsiooni:
- paljundatakse geenist ülesvoolu jääv järjestus;
- paljundatakse geenist allavoolu jääv järjestus;
- paljundatakse selektsioonimarker.
Teises etapis liidetakse saadud DNA fragmendid
ning lõpptulemusna saadakse üks DNA molekul.
Homosügootne geenideletsioon konstrueeritakse kahe järjestikuse transformatsiooni abil (joonis 10):
- Geeni esimene alleel deleteeritakse C. dubliniensis HIS1 markergeeni kasutades. Transformandid selekteeritakse söötmel, millest puudub histidiin.
- Geeni teine alleel deleteeritakse C. maltosa LEU2 markergeeni kasutades. Transformandid selekteeritakse söötmel, millest puuduvad histidiin ja leutsiin.
