UAU geenideletsiooni meetod
UAU geenideletsiooni meetod töötati välja A.P. Mitchelli laboris 2000. a. Kõikidest teistest meetoditest erineb ta selle poolest, et ühe transformatsiooni läbiviimisel saadakse homosügootne geenideletsioon (joonis 13). Algne tüvi peab olema auksotroofne uratsilli ja arginiini suhtes (ura3/ura3 arg4/arg4). DNA fragment, mis rakkudesse transformeeritakse, sisaldab deleteeritavast geenist ülesvoolu ja allavoolu jäävaid homoloogilisi järjestusi ning ARG4 markergeeni, mis on kloonitud URA3 markergeeni sisse. Transformandid selekteeritakse söötmel, millest puudub arginiin. Edasi kasvatatakse saadud Arg+ rakke mitteselektiivsel söötmel. Mõnedes rakkudes toimub mitootiline rekombinatsioon, mille tulemusena tekib uuritava geeni homosügootne deletsioon. Mõnedes rakkudes võib toimuda veel geenisisene rekombinatsioon, mille tulemusena kaob üks ARG4 alleel ning taastub URA3 markergeen. Neid rekombinante (Arg+ Ura+) selekteeritakse söötmel, millest puudub nii arginiin kui ka uratsiil. Sellel söötmel kasvavad rakud, kelle genoomist on deleteeritud uuritava geeni mõlemad alleelid (homosügootsed geenideletsioonid).
![](Candida_13.jpg)