"SAT1 Flipper" süsteem
"SAT1 Flipper" süsteemi töötasid välja J. Morschhauser ja kaastöötajad 2004. a. See süsteem võimaldab selektsioonimarkeri eemaldamist ilma 5-FOA söödet kasutamata. Meetod ei kasuta ka auksotroofseid selektsioonimarkereid ning sobib enamike C. albicans tüvede (sealhulgas kliiniliste isolaatide) transformeerimiseks.
Rakkudesse transformeeritakse DNA fragment, mis sisaldab lookuse spetsiifilisi ülesvoolu ja allavoolu jäävaid homoloogilisi järjestusi, SAT1 geeni (tagab resistentsuse antibiootikumi nourseotritsiin suhtes), maltoosi poolt reguleeritava MAL2 promootori kontrolli all ekspresseeruvat FLP geeni ja kahte Flprekombinaasi poolt äratuntavat järjestust (joonis 12). Lineaarne DNA fragment transformeeritakse C. albicans rakkudesse ning transformandid selekteeritakse söötmel, mis sisaldab nourseotritsiini. SAT1-FLP kasseti eemaldamiseks külvatakse rakud söötmele, mis sisaldab maltoosi. Sellel söötmel aktiveeritakse FLP rekombinaasi ekspressioon ning Flp eemaldab genoomsest DNA-st selektsioonimarkeri ning iseenda ekspressioonikasseti. Genoomi jääb alles vaid üks Flp poolt äratuntav järjestus. Geeni teise alleeli deleteerimiseks tuleb transformatsiooni korrata.
![](Candida_12.jpg)