Rakuvaba valgusünteesi rakendamine inimese neuroblastoomi SH-SY5Y rakuliinis

Abstract

Bakalaureuse töö eesmärk oli luua inimese neuroblastoomi rakuliini SH-SY5Y kasutades mudelsüsteem erinevate RNA-d siduvate valkude ja komplekside uurimiseks, et neid oleks võimalik välja puhastada ja kasutada struktuuribioloogilistes uuringutes. Töö käigus töötati välja metoodika SH-SY5Y rakuliinist translatsiooniekstrakti eraldamiseks ning ekstrakte kasutades leiti in vitro valgusünteesiks K + , Mg2+ ja mRNA optimaalsed tingimused. Tulemustest selgus, et G3BP-2 seostus mRNA külge ja ei oma endonukleaasset aktiivsust. Valgud G3BP-2 ja Caprin-1 langetasid koosmõjul valgusünteesi aktiivsust rohkem kui ainult G3BP-2-te kasutades, seejuures Caprin-1 valgusünteesile märgatavat mõju ei avaldanud. Western Blot meetod näitas, et translatsiooniekstraktile lisatud G3BP-2 ja Caprin-1 olid üleesindatud 40S subühikuid sisaldavas fraktsioonis.